細胞培養(yǎng)——收到細胞的處理方式

                                                                        圣賓儀器科技上海有限公司

       細胞活化︰  
 1. 收到細胞株包裹時， 請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形， 若有請立即通知。細胞  株請盡速開始培養(yǎng)， 或立即冷凍保存(置于–70 °C， 隔夜后， 移到liq N2)。   
2.冷凍細胞解凍程序:  
2.1. 依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單指定之基礎培養(yǎng)基種類、血清種類和其它指定之成份和比  例， 制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細胞均無法立即適應不同之基礎培養(yǎng)基或不同之  血清種類， 若因實驗需要， 必須有所不同時， 務必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)  基組成， 確定細胞適應后， 方進行所需之實驗。 
2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse  serum, 馬血清)，對細胞而言差異極大，請務必依據(jù)細胞株資料單指定之血清種  類培養(yǎng)之。 
2.3. 將培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫， 回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之， 移入無  菌操作臺內。取出冷凍管， 立即放入37 °C 水槽中快速解凍， 水面高度不可  接近或高過冷凍管之蓋沿， 否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全  部融化后， 以70 % ethanol 擦拭冷凍管外部， 移入無菌操作臺內。 
2.4. 依據(jù)細胞種類和濃度，于無菌操作臺內取10 ml 培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask  中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內之培養(yǎng)基， 混  合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
2.5. 對絕大多數(shù)細胞而言，1 % 以下之冷凍保護劑DMSO，不會對細胞之貼附或活  化有不佳影響，不需立刻由解凍細胞中去除， 待di二天確定細胞生長或貼附良  好后再去除即可。惟對極少數(shù)因對DMSO 敏感或會造成細胞分化之細胞，需  立即去除DMSO 者， 則可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中，  離心300 xg (約1000 rpm)，5 分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基，  將細胞均勻混合后， 轉移至培養(yǎng)瓶中， 再放入37 °C， 5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 
收到T25 flask 細胞時， 處理方式為︰  
1. 于寄送過程中，為避免起泡造成細胞脫落死亡，T25 flask 均加滿培養(yǎng)基。請檢查  flask 外觀，并于顯微鏡下觀察細胞生長狀況和有無污染現(xiàn)象，若有任何問題， 不  要打開蓋子，請立即通知細胞實驗室。 
2. 將原封之T25 flask 靜置于37 °C， 5 % CO2 培養(yǎng)箱中，使細胞回溫至37 °C， 并  讓運送過程中少數(shù)脫落的細胞可再附著生長。隔天后，于無菌操作箱內取出flask  內之培養(yǎng)基，(取出之培養(yǎng)基可以再使用)，僅留約5-10ml 培養(yǎng)基于flask 內，依  一般培養(yǎng)方式再將細胞置入培養(yǎng)箱中，或細胞已長滿盤， 則將細胞做傳代培養(yǎng)。

                                                                                                                                                                   本篇轉載至實驗之家